Administration ciblée de médicament dans un modèle murin par injection de citerne magna

Dans cet article

Résumé

Source : Zamboni, M., et al., Induction de la modification des cellules leptoméningées par injection intracisternale. J. Vis. Exp. (2020)

Cette vidéo montre la procédure d’administration d’un médicament inducteur dans la citerne magna d’une souris anesthésiée. L’injection induit sélectivement l’expression de marqueurs fluorescents dans les cellules de surface du cerveau accessibles via le liquide céphalo-rachidien, confirmée par l’imagerie par fluorescence.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Positionnement de l’animal pour la procédure

Fixez la tête de l’animal sur le support de tête. Pour améliorer l’accessibilité à la citerne magna, placez le corps de l’animal à environ 30° de la surface de la table et la tête vers le bas, afin d’établir un angle de 120° avec le reste du corps et d’étendre l’arrière du cou pour faciliter l’accès à la citerne magna (Figure 1A).
Ajoutez des serviettes en papier sous l’animal pour soutenir son corps tout au long de la procédure.
Sécurisez l’administration de l’anesthésie par l’embout buccal et réduisez la concentration d’isoflurane à 2,5 % et l’administration d’air à 200 ml/min.
Appliquez une pommade ophtalmique.

2. Exposition de la citerne Magna

Rasez l’arrière du cou de l’animal et désinfectez la zone avec 70 % d’éthanol et de bétadine.
À l’aide de ciseaux chirurgicaux, effectuez une incision médiane (d’environ 7 mm de longueur) en commençant au niveau de l’os occipital et en l’étendant vers l’arrière.
Séparez doucement le tissu conjonctif superficiel et les muscles du cou, en tirant latéralement à partir de la ligne médiane à l’aide d’une pince à épiler à pointe fine. Cela exposera la membrane durale recouvrant la citerne magna, en forme de triangle inversé.
Utilisez des lances d’absorption stériles ou des cotons-tiges pour contrôler tout saignement qui en résulte.
Positionnez un petit séparateur chirurgical pour maintenir les muscles du cou écartés et permettre la visualisation de la citerne magna tout au long de la procédure.

3. Injection intracisternale

Pour accéder à la citerne magna, identifiez l’extrémité caudale de l’os occipital et insérez l’aiguille qui était précédemment pliée immédiatement en dessous.
REMARQUE : Il y aura une baisse soudaine de la résistance lorsque la membrane durale sera perforée. Cependant, la pointe de l’aiguille ne pénétrera que légèrement sous la surface méningée, grâce à sa forme crochue.
Une fois la dure-mère perforée, laissez la pointe courbée de l’aiguille pénétrer sous la surface de la durale en tirant doucement la seringue vers le haut et parallèlement au corps de l’animal, afin d'« accrocher » l’aiguille au crâne (voir Figure 1B). Cela assurera une meilleure stabilité et empêchera l’aiguille de pénétrer plus profondément, évitant ainsi le risque d’endommager le cervelet ou la moelle épinière sous-jacente.
Injectez lentement le composé pour éviter d’interférer avec le flux naturel du liquide céphalo-rachidien.
REMARQUE : Selon le but de l’expérience, le débit de perfusion peut varier. Si un débit de perfusion lent et régulier est nécessaire (par exemple, lors de l’utilisation de la procédure pour suivre le mouvement du liquide céphalo-rachidien), il peut être conseillé d’utiliser un système de micro-perfusion automatisé en combinaison avec la seringue.
Après l’injection, laissez l’aiguille reposer dans le site pendant 1 minute et retirez-la soigneusement. Utilisez une pince à pointe fine pour aider à la rétraction de l’aiguille de sa position crochue.
REMARQUE : L’utilisation d’une aiguille fine (par exemple, 30 G) n’entraîne pas de dommages importants à la membrane méningée et ne provoque pas d’écoulement conséquent du liquide céphalo-rachidien. Si des aiguilles de plus grande taille sont nécessaires, nous vous recommandons d’arrêter la fuite de liquide en appliquant une pression sur le site d’injection à l’aide d’un embout en coton stérile.

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Résultats

Figure 1 : Marquage spécifique des cellules leptoméningées par injection intracisternale d’endoxifène. Les panneaux A et B illustrent la procédure développée pour l’administration intracisternale. ...